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共焦点レーザー内視鏡検査は、リアルタイム光生検の新しい方法です。組織学的品質の蛍光画像は、管腔臓器の上皮から即座に取得できます。現在、スキャンは臨床現場で一般的に使用されているプローブベースの機器を使用して近位で実行されており、焦点制御の柔軟性は限られています。内視鏡の遠位端に取り付けられたパラメトリック共鳴スキャナを使用して、高速横方向偏向を実行する方法を示します。光路を巻き上げるためにリフレクターの中心に穴がエッチングされています。この設計により、器具のサイズが直径 2.4 mm、長さ 10 mm に縮小され、標準的な医療内視鏡の作業チャネルを通って前方に挿入できるようになります。コンパクトなレンズは、横方向と軸方向の解像度がそれぞれ 1.1 μm と 13.6 μm です。0 µm の作動距離と 250 µm × 250 µm の視野が、最大 20 Hz のフレームレートで実現されます。488 nm で励起すると、FDA が承認した高い組織コントラスト用色素であるフルオレセインが励起されます。内視鏡は、臨床的に承認された滅菌方法を使用して、失敗することなく 18 サイクル再処理されています。通常の結腸内視鏡検査中に、正常な結腸粘膜、管状腺腫、過形成性ポリープ、潰瘍性結腸炎、およびクローン病結腸炎から蛍光画像が得られました。結腸細胞、杯細胞、炎症細胞などの単一細胞を識別できます。陰窩構造、陰窩空洞、固有層などの粘膜の特徴を区別できます。この機器は、従来の内視鏡検査の補助として使用できます。
共焦点レーザー内視鏡検査は、通常の内視鏡検査の補助として臨床使用するために開発されている新しい画像診断モダリティです1、2、3。これらの柔軟な光ファイバー接続機器は、結腸などの中空器官の内側を覆う上皮細胞の疾患を検出するために使用できます。この薄い組織層は代謝活性が高く、がん、感染症、炎症などの多くの病気の原因となります。内視鏡検査は細胞以下の解像度を実現し、組織学的に近い品質の生体内画像をリアルタイムで提供し、臨床医が臨床上の意思決定を行うのに役立ちます。物理的な組織生検には、出血や穿孔のリスクが伴います。収集される生検標本が多すぎたり、少なすぎたりすることがよくあります。サンプルが採取されるたびに手術費用が増加します。病理学者によるサンプルの評価には数日かかります。病理学の結果を待つ日々の間、患者はしばしば不安を経験します。対照的に、MRI、CT、PET、SPECT、超音波などの他の臨床画像モダリティには、生体内の上皮プロセスをリアルタイムの細胞以下の解像度で視覚化するために必要な空間解像度と時間速度が不足しています。
プローブベースの機器 (Cellvizio) は現在、診療所で「光生検」を行うために一般的に使用されています。この設計は、蛍光画像を収集して送信する空間的にコヒーレントな光ファイバー束 4 に基づいています。単一のファイバーコアは、細胞内解像度を実現するために焦点の合っていない光を空間的にフィルターする「穴」として機能します。スキャンは、大型でかさばる検流計を使用して近位で実行されます。この規定により、フォーカス制御ツールの機能が制限されます。早期上皮癌の適切な病期分類には、浸潤を評価し、適切な治療法を決定するために組織表面の下を視覚化する必要があります。FDA 承認の造影剤であるフルオレセインは、上皮の構造的特徴を強調するために静脈内投与されます。 これらの内視鏡は直径 2.4 mm 未満の寸法を持ち、標準的な医療用内視鏡の生検チャネルを簡単に前方に通すことができます。 これらの内視鏡は直径 2.4 mm 未満の寸法を持ち、標準的な医療用内視鏡の生検チャネルを簡単に前方に通すことができます。 Эти эндомикроскопы имеют размеры <2,4 мм в диаметре и могут быть легко проведены через биопсийный канал стандартных дицинских эндоскопов。 これらの内視鏡は直径が 2.4 mm 未満で、標準的な医療内視鏡の生検チャンネルを簡単に通過できます。これらのボアスコープは直径 2.4 mm 未満で、標準的な医療用ボアスコープの生検チャンネルを容易に通過できます。この柔軟性により、内視鏡メーカーに依存せず、幅広い臨床用途が可能になります。この画像装置を使用して、食道、胃、結腸、口腔のがんの早期発見など、数多くの臨床研究が行われています。画像処理プロトコルが開発され、その安全性が確立されています。
微小電気機械システム (MEMS) は、内視鏡の遠位端で使用される小型の走査機構を設計および製造するための強力なテクノロジーです。この位置（近位と比較して）により、焦点位置をより柔軟に制御できます5、6。側方偏向に加えて、遠位機構は軸方向スキャン、対物レンズ後スキャン、およびランダム アクセス スキャンも実行できます。これらの機能により、垂直断面イメージング 7、広い視野 (FOV) 8 の収差のないスキャン、ユーザー定義のサブ領域 9 でのパフォーマンスの向上など、より包括的な上皮細胞の検査が可能になります。MEMS は、機器の遠端にある限られたスペースでスキャン エンジンをパッケージ化するという深刻な問題を解決します。大型の検流計と比較して、MEMS は小型、高速、低消費電力で優れたパフォーマンスを提供します。シンプルな製造プロセスをスケールアップして、低コストで大量生産できます。多くの MEMS 設計が以前に報告されています 10、11、12。どの技術も、医療用内視鏡の作業チャネルを介したリアルタイム生体内イメージングの広範な臨床使用を可能にするために、まだ十分に開発されていません。ここでは、ルーチンの臨床内視鏡検査中に生体内人間の画像を取得するための内視鏡の遠位端にある MEMS スキャナーの使用を実証することを目的としています。
同様の組織学的特徴を持つリアルタイムの生体内蛍光画像を収集するために、遠位端に MEMS スキャナーを使用して光ファイバー機器が開発されました。シングルモードファイバー (SMF) は柔軟なポリマーチューブに封入されており、λex = 488 nm で励起されます。この構成により、遠位先端の長さが短縮され、標準的な医療内視鏡の作業チャネルを通って前方に通すことが可能になります。先端を使って光学部品を中心に置きます。これらのレンズは、開口数 (NA) = 0.41、作動距離 = 0 µm でほぼ回折軸上分解能を達成するように設計されています13。光学系１４を正確に位置合わせするために精密シムが作られる。スキャナは、直径２．４ｍｍ、長さ１０ｍｍの剛性の遠位端を備えた内視鏡内にパッケージされる（図１ａ）。これらの寸法により、内視鏡検査中の付属品として臨床現場で使用することができます (図 1b)。組織に入射するレーザーの最大出力は 2 mW でした。
共焦点レーザー内視鏡 (CLE) および MEMS スキャナー。(a) 直径 2.4 mm、長さ 10 mm の剛性の遠位先端寸法を備えたパッケージ化された器具、および (b) 標準的な医療用内視鏡 (Olympus CF-HQ190L) の作業チャネルを通る真っ直ぐな通路を示す写真。(c) 励起ビームが通過する中心開口部 50 μm の反射鏡を示すスキャナーの正面図。スキャナは、一連の直交コムドライブ ドライブによって駆動されるジンバルに取り付けられています。デバイスの共振周波数は、ねじりバネのサイズによって決まります。(d) スキャナの側面図。駆動信号と電力信号の接続ポイントを提供する電極アンカーに接続されたワイヤでスタンドに取り付けられたスキャナを示しています。
走査機構は、一組の櫛駆動直交アクチュエータによって駆動されるジンバルに取り付けられた反射鏡で構成され、リサージュパターンでビームを横方向（XY平面）に偏向します（図1c）。中心には直径 50 μm の穴がエッチングされ、励起ビームが通過しました。スキャナは設計の共振周波数で駆動され、ねじりバネの寸法を変更することで調整できます。デバイスの周囲には電極アンカーが刻まれており、電力と制御信号の接続ポイントが提供されます（図1d）。
イメージング システムは、手術室に転がり込むことができるポータブル カートに搭載されています。グラフィカル ユーザー インターフェイスは、医師や看護師など、最小限の技術知識を持つユーザーをサポートするように設計されています。スキャナの駆動周波数、ビームフォーム モード、画像の FOV を手動で確認します。
内視鏡の全長は約 4 メートルで、標準的な医療用内視鏡 (1.68 メートル) の作業チャネルを器具が完全に通過できるように、操作性を高めるために余分な長さを備えています。内視鏡の近位端では、SMF とワイヤはベース ステーションの光ファイバ ポートと有線ポートに接続するコネクタで終端します。この設備には、レーザー、フィルター ユニット、高電圧増幅器、光電子増倍管検出器 (PMT) が含まれています。アンプはスキャナに電力と駆動信号を供給します。光学フィルターユニットはレーザー励起を SMF に結合し、蛍光を PMT に渡します。
内視鏡は、臨床処置ごとに STERRAD 滅菌プロセスを使用して再処理され、故障することなく最大 18 サイクルに耐えることができます。OPA 溶液の場合、10 回を超える消毒サイクルの後でも損傷の兆候は観察されませんでした。OPA の結果は STERRAD の結果を上回り、再滅菌ではなく高度な消毒によって内視鏡の寿命が延びる可能性があることを示唆しています。
画像解像度は、直径 0.1 μm の蛍光ビーズを使用した点広がり関数から決定されました。横方向および軸方向の分解能については、それぞれ 1.1 および 13.6 μm の半値全幅 (FWHM) が測定されました (図 2a、b)。
画像オプション。集光光学系の横方向 (a) および軸方向 (b) の解像度は、直径 0.1 μm の蛍光微小球を使用して測定される点広がり関数 (PSF) によって特徴付けられます。測定された半値全幅 (FWHM) は、それぞれ 1.1 および 13.6 μm でした。挿入図: 単一の微小球の横方向 (XY) および軸方向 (XZ) の拡大図が示されています。(c) 標準 (USAF 1951) ターゲット ストリップ (赤い楕円形) から得られた蛍光画像。グループ 7 ～ 6 が明確に分離できることを示しています。(d) 250 μm×250 μm の画像視野を示す、直径 10 μm の分散蛍光微小球の画像。(a、b) の PSF は、MATLAB R2019a (https://www.mathworks.com/) を使用して構築されました。(c、d) LabVIEW 2021 (https://www.ni.com/) を使用して蛍光画像を収集しました。
標準解像度レンズからの蛍光画像は、高い横方向解像度を維持するグループ 7 ～ 6 のカラムのセットを明確に区別します (図 2c)。カバースリップ上に分散された直径10μmの蛍光ビーズの画像から、250μm×250μmの視野（FOV）が決定されました（図2d）。
PMT ゲイン制御と位相補正の自動化された方法が臨床画像システムに実装され、内視鏡、結腸の蠕動運動、および患者の呼吸による動きアーチファクトが軽減されます。画像の再構成と処理アルゴリズムは以前に説明されています14、15。PMT ゲインは、強度飽和を防ぐために比例積分 (PI) コントローラーによって制御されます 16。システムは、各フレームの最大ピクセル強度を読み取り、比例応答と積分応答を計算し、ピクセル強度が許容範囲内に収まるように PMT ゲイン値を決定します。
in vivo イメージング中、スキャナーの動きと制御信号の間の位相の不一致により、画像のぼやけが発生する可能性があります。このような影響は、人体内のデバイスの温度変化によって発生する可能性があります。白色光画像は、内視鏡が生体内で正常な結腸粘膜に接触していることを示しました（図 3a）。正常な結腸粘膜の生画像では、位置がずれたピクセルのぼやけが見られます (図 3b)。適切な位相とコントラストの調整による治療後、粘膜の細胞内特徴を区別することができました (図 3c)。追加情報として、生の共焦点画像と処理されたリアルタイム画像を図S1に示し、リアルタイムおよび後処理に使用される画像再構成パラメータを表S1と表S2に示します。
画像処理。(a) フルオレセイン投与後の in vivo 蛍光画像を収集するために正常 (N) 結腸粘膜に接触して配置された内視鏡 (E) を示す広角内視鏡画像。(b) スキャン中に X 軸と Y 軸をさまようと、ピクセルの位置がずれてぼやける可能性があります。デモンストレーションの目的で、元の画像に大きな位相シフトが適用されます。(c) 後処理位相補正後、固有層 (lp) に囲まれた中央管腔 (l) を持つ陰窩構造 (矢印) を含む粘膜の詳細を評価できます。結腸細胞 (c)、杯細胞 (g)、炎症細胞 (矢印) などの単一細胞を区別できます。追加のビデオ 1 を参照してください。(b、c) LabVIEW 2021 を使用して処理された画像。
共焦点蛍光画像は、いくつかの結腸疾患において in vivo で取得され、この機器の幅広い臨床応用可能性を実証しています。まず白色光を使用して広角イメージングを実行し、著しく異常な粘膜を検出します。次に、内視鏡は結腸鏡の作業チャネルを通って前進し、粘膜と接触させられます。
管状腺腫や過形成性ポリープなどの結腸新生物の広視野内視鏡検査、共焦点内顕微鏡検査、および組織学 (H&E) 画像が表示されます。 管状腺腫や過形成性ポリープなどの結腸新生物の広視野内視鏡検査、共焦点内顕微鏡検査、および組織学 (H&E) 画像が表示されます。 Широкопольная эндоскопия, конфокальная эндомикроскопия и гистологические (H&E) изображения показаны для неоплазии тол стой киски, включая тубулярную аденому и гиперпластический полип. 結腸内視鏡検査、共焦点内顕微鏡検査、組織学的（H&E）画像検査は、管状腺腫や過形成性ポリープなどの結腸新生物に適応されます。管状腫瘍および増殖性腫瘍を含む）の角内検査、共焦点微小内検査および組織構造（H&E）画像を表示する。共設定脚肠化（画像状態躰化と生性情報肉）の微小全点での角内共光共光（H&E）画像。 Широкопольная эндоскопия, конфокальная микроэндоскопия и гистологические (H&E) изображения, показывающие опухоли т олстой килючая тубулярные аденомы и гиперпластические полипы. 管状腺腫や過形成性ポリープなどの結腸の腫瘍を示す広視野内視鏡検査、共焦点微小内視鏡検査、および組織学的 (H&E) 画像。管状腺腫は、正常な陰窩構造の喪失、杯細胞のサイズの縮小、陰窩内腔の歪み、および固有層の肥厚を示した(図4a〜c)。過形成性ポリープは、陰窩の星状構造、少数の杯細胞、陰窩のスリット状内腔、および不規則な層状陰窩を示した（図４ｄ～ｆ）。
生体内における粘膜の厚い皮膚の画像。 (ac) 腺腫、(df) 過形成性ポリープ、(gi) 潰瘍性大腸炎、および (jl) クローン病大腸炎の代表的な白色光内視鏡、共焦点内視鏡、および組織学 (H&E) 画像を示します。 (ac) 腺腫、(df) 過形成性ポリープ、(gi) 潰瘍性大腸炎、および (jl) クローン病大腸炎の代表的な白色光内視鏡、共焦点内視鏡、および組織学 (H&E) 画像を示します。 Типичные изображения эндоскопии в белом свете, конфокального эндомикроскопа и гистологии (H&E) показаны для (ac) ы、(df) гиперпластического полипа、(gi) язвенного колита и (jl) колита Крона。 (ac) 腺腫、(df) 過形成性ポリープ、(gi) 潰瘍性大腸炎、および (jl) クローン病大腸炎の典型的な白色光内視鏡、共焦点内視鏡、組織学 (H&E) 画像を示します。(ac) 腺腫瘍、(df) 増生性息肉、(gi) 溃疡性肠炎、(jl) 克罗イオン肠炎の代表的な白色光内窥镜検査、共焦点内窥镜検査および組織構造を示します。 H&E) の画像。 それは、(ac) 躰真、(df) 增生性息肉、(gi) 苏盖性红肠炎および(jl) 克罗恩红肠炎の体育性白光内肠肠炎性、共公司内肠肠炎性および電視学( H&E ） 画像。 Представлены репрезентативные эндоскопия в белом свете, конфокальная эндоскопия и гистология (ac) аденомы, (df) гиперпласт ического полипоза、(gi) язвенного колита и (jl) колита Крона (H&E)。 代表的な白色光内視鏡検査、共焦点内視鏡検査、および (ac) 腺腫、(df) 過形成性ポリポーシス、(gi) 潰瘍性大腸炎、および (jl) クローン病大腸炎 (H&E) の組織学を示します。(B) は、内視鏡 (E) を使用して管状腺腫 (TA) から生体内で得られた共焦点画像を示します。この前癌性病変は、正常な陰窩構造の喪失（矢印）、陰窩内腔の歪み（l）、および陰窩固有層の密集（lp）を示します。結腸細胞 (c)、杯細胞 (g)、炎症細胞 (矢印) も識別できます。Ｓｍｔ．補足ビデオ 2。(e) は、生体内で過形成性ポリープ (HP) から得られた共焦点画像を示しています。この良性病変は、星状陰窩構造（矢印）、スリット状陰窩内腔（l）、および不規則な形状の固有層（lp）を示します。結腸細胞 (c)、いくつかの杯細胞 (g)、および炎症細胞 (矢印) も識別できます。Ｓｍｔ．補足ビデオ 3. (h) は、in vivo で潰瘍性大腸炎 (UC) で取得された共焦点画像を示しています。この炎症状態では、歪んだ陰窩構造 (矢印) と顕著な杯細胞 (g) が示されています。フルオレセインの羽根 (f) は上皮細胞から押し出され、血管透過性の増加を反映しています。多数の炎症細胞（矢印）が固有層（lp）に見られます。Ｓｍｔ．補足ビデオ 4. (k) は、クローン病大腸炎 (CC) の領域から生体内で得られた共焦点画像を示しています。この炎症状態では、歪んだ陰窩構造 (矢印) と顕著な杯細胞 (g) が示されています。フルオレセインの羽根 (f) は上皮細胞から押し出され、血管透過性の増加を反映しています。多数の炎症細胞（矢印）が固有層（lp）に見られます。Ｓｍｔ．補足ビデオ 5. (b、d、h、l) LabVIEW 2021 を使用して処理された画像。
潰瘍性大腸炎 (UC) (図 4g ～ i) およびクローン病大腸炎 (図 4j ～ l) を含む結腸炎症の同様の画像セットが示されています。炎症反応は、杯細胞が突出した歪んだ陰窩構造を特徴とすると考えられています。フルオレセインは上皮細胞から絞り出され、血管透過性の増加を反映します。固有層には多数の炎症細胞が見られます。
我々は、生体内画像取得のために遠位に配置された MEMS スキャナを使用する、柔軟なファイバー結合共焦点レーザー内視鏡の臨床応用を実証しました。共振周波数では、高密度リサージュ スキャン モードを使用してモーション アーチファクトを低減し、最大 20 Hz のフレーム レートを実現できます。光路は、1.1 μm の横分解能を達成するのに十分なビーム拡張と開口数を提供するために折り畳まれています。組織学的品質の蛍光画像は、正常な結腸粘膜、管状腺腫、過形成性ポリープ、潰瘍性結腸炎、およびクローン病結腸炎のルーチン結腸内視鏡検査中に得られました。結腸細胞、杯細胞、炎症細胞などの単一細胞を識別できます。陰窩構造、陰窩空洞、固有層などの粘膜の特徴を区別できます。精密ハードウェアは微細加工されており、直径 2.4 mm x 長さ 10 mm の機器内の個々の光学コンポーネントと機械コンポーネントが正確に位置合わせされます。光学設計により、医療用内視鏡の標準サイズ (直径 3.2 mm) の作業チャネルを直接通過できるように、剛性遠位先端の長さが十分に短縮されています。そのため、メーカーを問わず、医師の常駐先で幅広くご利用いただけます。高コントラストを得るために、FDA 承認色素であるフルオレセインを励起するために、λex = 488 nm で励起を実行しました。この器具は、臨床的に認められた滅菌方法を使用して 18 サイクルにわたって問題なく再処理されました。
他の 2 つの機器設計は臨床的に検証されています。Cellvizio (Mauna Kea Technologies) は、マルチモード コヒーレント光ファイバー ケーブルの束を使用して蛍光画像を収集および送信するプローブベースの共焦点レーザー内視鏡 (pCLE) です1。ベースステーションに配置されたガルボミラーは、近位端で横方向のスキャンを実行します。光学切片は水平面 (XY) で深さ 0 ～ 70 µm で収集されます。マイクロプローブ キットは、直径 0.91 (19 G 針) から 5 mm まで入手可能です。1 ～ 3.5 μm の横方向分解能を達成しました。画像は、240 ～ 600 μm の一次元視野で 9 ～ 12 Hz のフレーム レートで収集されました。このプラットフォームは、胆管、膀胱、結腸、食道、肺、膵臓などのさまざまな領域で臨床的に使用されています。Optiscan Pty Ltd は、業務用内視鏡 (EC-3870K、Pentax Precision Instruments) の挿入チューブ (遠位端) にスキャン エンジンを内蔵した内視鏡ベースの共焦点レーザー内視鏡 (eCLE) を開発しました 17 。光学セクションはシングルモードファイバーを使用して実行され、サイドスキャンは共振音叉を介したカンチレバー機構を使用して実行されました。形状記憶合金 (ニチノール) アクチュエーターを使用して、軸方向の変位を生成します。共焦点モジュールの合計直径は 5 mm です。フォーカシングには、NA = 0.6 の開口数を備えた GRIN レンズが使用されます。水平画像は、フレームレート 0.8 ～ 1.6 Hz、視野 500 μm × 500 μm で、横方向解像度と軸方向解像度それぞれ 0.7 μm と 7 μm で取得されました。
私たちは、遠位端の MEMS スキャナーを使用して、医療用内視鏡を介して人体から細胞内解像度の in vivo 蛍光イメージングを取得することを実証します。蛍光は高い画像コントラストを提供し、細胞表面の標的に結合するリガンドを蛍光色素で標識して、疾患診断を改善するための分子同一性を提供できます 18。生体内微小内視鏡検査のための他の光学技術も開発されています。 OCT は、広帯域光源からの短いコヒーレンス長を使用して、深さが 1 mm を超える垂直面の画像を収集します19。 OCT は、広帯域光源からの短いコヒーレンス長を使用して、深さが 1 mm を超える垂直面の画像を収集します19。 ОКТ использует короткую длину когерентности зирокополосного источника света для сбора изображений в вертикальной >1分19秒。 OCT は、広帯域光源の短いコヒーレンス長を使用して、深さ 1 mm を超える垂直面の画像を取得します19。 ＯＣＴは、垂直平面内の深さ＞１ｍｍ１９の画像を収集するために、ベルト光源の短相位相長を使用する。1mm19の画像。 ОКТ использует короткую длину когерентности зирокополосного источника света для сбора изображений на глубине >1 ммммене Свертикальной плоскости。 OCT は、広帯域光源の短いコヒーレンス長を使用して、垂直面で 1 mm を超える画像を取得します19。ただし、この低コントラストのアプローチは後方散乱光の収集に依存しており、画像の解像度はスペックル アーティファクトによって制限されます。光音響内視鏡は、音波を発生するレーザーパルスの吸収後の組織内の急速な熱弾性膨張に基づいて生体内画像を生成します20。 このアプローチは、治療をモニターするために生体内でヒト結腸内で 1 cm を超える深さのイメージングを実証しました。 このアプローチは、治療をモニターするために生体内でヒト結腸内で 1 cm を超える深さのイメージングを実証しました。 生体内での検査は、1 日以内に行われます。 このアプローチは、治療モニタリングのために生体内でヒト結腸内で 1 cm を超える深さのイメージングを実証しました。この方法は、体内の人間の治療のために１μｍを超える深さを形成することが実証されている。この方法は、体内の人間の体内での画像深度が 1 を超えていると報告されています。 生体内では、1 つ以上の細胞が存在します。 このアプローチは、治療をモニターするために、生体内で人間の結腸内で 1 cm を超える深さのイメージングで実証されています。コントラストは主に血管内のヘモグロビンによって生成されます。多光子内視鏡では、2 つ以上の NIR 光子が同時に組織生体分子に当たると、高コントラストの蛍光画像が生成されます21。 このアプローチでは、低い光毒性で 1 mm を超えるイメージング深度を達成できます。 このアプローチでは、低い光毒性で 1 mm を超えるイメージング深度を達成できます。 Этот подход может обеспечить глубину изображения > 1 мм с низкой фототоксичностью. このアプローチでは、光毒性が低く、1 mm を超える画像深度を提供できます。この方法は、光毒性が低く、１メートルを超える画像深さを実現することができる。この方法は、光毒性が低く、１メートルを超える画像深さを実現することができる。 Этот подход может обеспечить глубину изображения > 1 мм с низкой фототоксичностью. このアプローチでは、光毒性が低く、1 mm を超える画像深度を提供できます。高強度のフェムト秒レーザー パルスが必要ですが、この方法は内視鏡検査では臨床的に証明されていません。
このプロトタイプでは、スキャナーは横方向の偏向のみを実行するため、光学部品は水平面 (XY) 平面内にあります。このデバイスは、Cellvizio システムのガルバニック ミラー (12 Hz) よりも高いフレーム レート (20 Hz) で動作できます。フレーム レートを上げるとモーション アーティファクトが軽減され、フレーム レートを下げると信号が強化されます。内視鏡の動き、呼吸の動き、腸の運動によって引き起こされる大きな動きアーチファクトを軽減するには、高速で自動化されたアルゴリズムが必要です。パラメトリック共鳴スキャナは、数百ミクロンを超える軸方向の変位を達成することが示されています22。 画像は粘膜表面に垂直な垂直面 (XZ) で収集され、組織学 (H&E) と同じビューが提供されます。 画像は粘膜表面に垂直な垂直面 (XZ) で収集され、組織学 (H&E) と同じビューが提供されます。 Изображения могут быть получены в вертикальной плоскости (XZ), перпендикулярной поверхности слизистой оболочки, обеспечить такое же изображение, как при гистологии (H&E)。 画像は粘膜表面に垂直な垂直面 (XZ) で撮影され、組織学 (H&E) と同じ画像が得られます。画像は、組織（Ｈ＆Ｅ）と同じ画像を提供するために、粘膜表面に垂直な垂直平面（ＸＺ）で収集され得る。組織（H&E）を提供するために、粘膜表面に垂直な垂直平面（XZ）で画像を収集できます Изображения могут быть получены в вертикальной плоскости (XZ), перпендикулярной поверхности слизистой оболочки, обеспечить такое же изображение, как при гистологическом исследовании (H&E)。 粘膜表面に垂直な垂直面 (XZ) で画像を撮影し、組織学的検査 (H&E) と同じ画像を提供できます。スキャナは、照明ビームが主光軸に沿って照射される対物レンズ後の位置に配置して、収差に対する感度を低減できます8。回折限界に近い焦点体積は、任意の広い視野にわたって逸脱する可能性があります。ランダム アクセス スキャンを実行して、リフレクターをユーザー定義の位置に偏向させることができます9。視野を縮小して画像の任意の領域を強調し、信号対雑音比、コントラスト、フレーム レートを向上させることができます。スキャナーは簡単な工程で大量生産が可能です。各シリコンウェーハ上に数百のデバイスを作成することで、生産量を増やし、低コストの大量生産と幅広い流通を実現できます。
折り畳まれた光路により、剛性の遠位先端のサイズが小さくなり、日常的な結腸内視鏡検査中に内視鏡をアクセサリとして簡単に使用できるようになります。示された蛍光画像では、粘膜の細胞内特徴が見られ、管状腺腫 (前癌性) と過形成性ポリープ (良性) が区別されます。これらの結果は、内視鏡検査により不必要な生検の数を減らすことができることを示唆しています23。手術に伴う一般的な合併症を軽減し、モニタリング間隔を最適化し、軽度の病変の組織学的分析を最小限に抑えることができます。また、潰瘍性大腸炎 (UC) やクローン病などの炎症性腸疾患患者の in vivo 画像も示します。従来の白色光結腸内視鏡検査では、粘膜表面の肉眼的な観察が可能ですが、粘膜の治癒を正確に評価する能力は限られています。内視鏡検査は、抗 TNF24 抗体などの生物学的療法の有効性を評価するために in vivo で使用できます。正確な in vivo 評価は、病気の再発や手術などの合併症を軽減または予防し、生活の質を向上させることもできます。フルオレセイン含有内視鏡の in vivo での使用に関連した臨床研究では、重篤な副作用は報告されていません 25。 熱損傷のリスクを最小限に抑え、21 CFR 812 による重大でないリスクに関する FDA 要件を満たすために、粘膜表面のレーザー出力は 2 mW 未満に制限されました。 熱損傷のリスクを最小限に抑え、21 CFR 812 による重大でないリスクに関する FDA 要件を満たすために、粘膜表面のレーザー出力は 2 mW 未満に制限されました。 Мощность лазера на поверхности слизистой оболочки была ограничена до <2 мВт, чтобы свести к минимуму термическ ого повреждения и сответствовать требованиям FDA относительно незначительного риска26 согласно 21 CFR 812. 熱損傷のリスクを最小限に抑え、21 CFR 812 に基づく無視できるリスクに関する FDA 要件を満たすために、粘膜表面でのレーザー出力は 2 mW 未満に制限されました。粘膜表面のレーザー出力は、熱性重篤な病変を最大限に低減し、非重篤な病変に対する FDA 21 CFR 812 の要件を満たすために 2 mW 未満に制限されています。粘膜表面のレーザー出力制限は<2 mW Мощность лазера на поверхности слизистой оболочки была ограничена до <2 мВт, чтобы свести к минимуму термическ FDA 21 CFR 812 относительно незначительного риска26 を参照してください。 熱損傷のリスクを最小限に抑え、リスクが無視できるという FDA 21 CFR 812 要件を満たすために、粘膜表面でのレーザー出力は 2 mW 未満に制限されました26。
機器の設計を変更して画質を向上させることができます。球面収差を低減し、画像解像度を向上させ、作動距離を延ばすために、特別な光学系が利用可能です。SIL は、組織の屈折率 (約 1.4) とよりよく一致するように調整して、光結合を改善できます。駆動周波数を調整して、スキャナの横角を大きくし、画像の視野を広げることができます。自動化された方法を使用して、大きな動きのある画像のフレームを削除して、この影響を軽減できます。高速データ収集を備えたフィールド プログラマブル ゲート アレイ (FPGA) が、高性能のリアルタイム フルフレーム補正を提供するために使用されます。臨床的有用性を高めるために、自動化された方法は、リアルタイムの画像解釈のために位相シフトとモーションアーチファクトを補正する必要があります。モノリシック３軸パラメトリック共鳴スキャナを実装して、軸方向走査２２を導入することができる。 これらのデバイスは、軟化/硬化の混合ダイナミクスを特徴とする領域で駆動周波数を調整することにより、前例のない垂直変位 > 400 µm を達成するために開発されました27。 これらのデバイスは、軟化/硬化の混合ダイナミクスを特徴とする領域で駆動周波数を調整することにより、前例のない垂直変位 > 400 µm を達成するために開発されました27。 Эти устройства были разработаны для достижения беспрецедентного вертикального смещения > 400 мкм путем настройки ты возбуждения в режиме, который характеризуется смеланной динамикой смягчения/жесткости27。 これらのデバイスは、ソフト/ハードの混合ダイナミクスを特徴とするモードに駆動周波数を設定することで、400 μm を超える前例のない垂直変位を達成するように設計されています27。これらの装置は、混合変換／硬化力を有する状態で駆動周波数を調整することによって、これまで存在しなかった＞４００μｍの垂直シフトを実現するために開発された。これらの装置は、混合変換硬化状態の下で調整された駆動周波数で＞４００μｍの垂直シフト２７を実現するために開発された。 Эти устройства были разработаны для достижения беспрецентных вертикальных смещений >400 мкм путем настройки ы срабатывания в режиме со смезанной кинетикой размягчения/затвердевания27. これらのデバイスは、軟化/硬化混合速度論モードでトリガー周波数を調整することにより、前例のない > 400 µm の垂直変位を達成するように設計されています27。将来的には、垂直横断イメージングが早期がん (T1a) の病期分類に役立つ可能性があります。静電容量感知回路を実装して、スキャナの動きを追跡し、位相シフト２８を補正することができる。センサー回路を使用した自動位相校正は、使用前の手動の機器校正を置き換えることができます。より信頼性の高い機器シール技術を使用して処理サイクル数を増やすことで、機器の信頼性を向上させることができます。MEMS テクノロジーは、低侵襲な方法で中空臓器の上皮の視覚化、疾患の診断、治療のモニタリングを行うための内視鏡の使用を加速することを約束します。さらなる開発により、この新しい画像診断モダリティは、即時の組織学的検査のために医療用内視鏡の付属品として使用される低コストのソリューションとなり、最終的には従来の病理学的分析に取って代わる可能性があります。
ZEMAX 光学設計ソフトウェア (バージョン 2013) を使用してレイ トレーシング シミュレーションを実行し、集束光学系のパラメーターを決定しました。設計基準には、近回折軸方向分解能、作動距離 = 0 µm、および 250 × 250 µm2 を超える視野 (FOV) が含まれます。波長 λex = 488 nm で励起するには、シングルモード ファイバー (SMF) を使用しました。無彩色ダブレットは、蛍光収集の分散を減らすために使用されます (図 5a)。ビームはモードフィールド直径 3.5 μm の SMF を通過し、切断されることなく開口直径 50 μm の反射鏡の中心を通過します。入射ビームの球面収差を最小限に抑え、粘膜表面との完全な接触を確保するには、高屈折率 (n = 2.03) のハードイマージョン (半球) レンズを使用します。集束光学系は合計 NA = 0.41 を提供します。ここで NA = nsinα、n は組織の屈折率、α は最大ビーム収束角です。回折限界の横方向および軸方向の分解能は、NA = 0.41、λ = 488 nm、および n = 1.3313 を使用すると、それぞれ 0.44 および 6.65 µm です。外径 (OD) ≤ 2 mm の市販レンズのみが考慮されました。光路は折り曲げられ、SMF から出たビームはスキャナーの中央開口部を通過し、固定ミラー (直径 0.29 mm) によって反射されて戻ります。この構成により、硬質遠位端の長さが短くなり、医療用内視鏡の標準（直径 3.2 mm）作業チャネルを通る内視鏡の前方通過が容易になります。この機能により、日常の内視鏡検査の際のアクセサリーとして簡単に使用できます。
折り畳まれたライトガイドと内視鏡のパッケージ。(a) 励起ビームは OBC を出て、スキャナーの中央開口部を通過します。ビームは拡大され、固定円形ミラーから反射されてスキャナーに戻り、横方向に偏向されます。集束光学系は、一対の色消しダブレット レンズと、粘膜表面との接触を提供する固浸 (半球) レンズで構成されます。光学設計とレイ トレーシング シミュレーション用の Zemax 2013 (https://www.zemax.com/)。(b) シングルモードファイバー (SMF)、スキャナー、ミラー、レンズなどのさまざまな機器コンポーネントの位置を示します。内視鏡パッケージの 3D モデリングには、Solidworks 2016 (https://www.solidworks.com/) が使用されました。
波長 488 nm でモードフィールド直径 3.5 μm の SMF (#460HP、Thorlabs) を、焦点のぼけた光の空間フィルタリング用の「穴」として使用しました (図 5b)。SMF は柔軟なポリマー チューブ (#Pebax 72D、Nordson MEDICAL) に封入されています。患者と画像システム間の十分な距離を確保するために、約 4 メートルの長さが使用されます。2 mm MgF2 コーティングされた色消しダブレット レンズ (#65568、#65567、Edmund Optics) と 2 mm コーティングされていない半球レンズ (#90858、Edmund Optics) のペアを使用して、ビームを集束させ、蛍光を収集しました。スキャナの振動を遮断するために、樹脂とアウター チューブの間にステンレス鋼のエンド チューブ (長さ 4 mm、外径 2.0 mm、内径 1.6 mm) を挿入します。体液や取り扱い手順から機器を保護するために医療用接着剤を使用してください。コネクタを保護するために熱収縮チューブを使用してください。
コンパクトなスキャナはパラメトリック共振の原理に基づいて作られています。励起ビームを送信するために、リフレクターの中心に 50 μm の開口部をエッチングします。一連の直角位相コーム駆動ドライブを使用して、拡張されたビームはリサージュ モードで直交方向 (XY 平面) に横方向に偏向されます。データ収集ボード (#DAQ PCI-6115、NI) を使用して、スキャナを制御するためのアナログ信号を生成しました。電力は、細いワイヤ (#B4421241、MWS Wire Industries) を介して高電圧アンプ (#PDm200、PiezoDrive) によって供給されました。電極アーマチュアに配線を行います。スキャナは 15 kHz (高速軸) および 4 kHz (低速軸) に近い周波数で動作し、最大 250 µm × 250 µm の FOV を実現します。ビデオは 10、16、または 20 Hz のフレーム レートで撮影できます。これらのフレーム レートは、スキャナの X および Y 励起周波数の値に依存するリサージュ スキャン パターンの繰り返しレートに一致させるために使用されます29。フレーム レート、ピクセル解像度、スキャン パターン密度の間のトレードオフの詳細は、以前の研究で示されています14。
固体レーザー (#OBIS 488 LS、コヒーレント) は、画像コントラストのためにフルオレセインを励起するために λex = 488 nm を提供します (図 6a)。光ピグテールは、FC/APC コネクタ (損失 1.82 dB) を介してフィルタ ユニットに接続されます (図 6b)。ビームは、別の FC/APC コネクタを介して SMF 内のダイクロイック ミラー (#WDM-12P-111-488/500:600、Oz Optics) によって偏向されます。21 CFR 812 に従って、無視できるリスクに関する FDA 要件を満たすために、組織への入射電力は最大 2 mW に制限されています。蛍光は、ダイクロイックミラーおよび長い透過フィルター(#BLP01-488R、Semrock)を通過した。蛍光は、コア直径 50 µm の約 1 m 長のマルチモード ファイバーを使用して、FC/PC コネクタを介して光電子増倍管 (PMT) 検出器 (#H7422-40、浜松ホトニクス) に送信されました。蛍光シグナルは高速電流増幅器 (#59-179、Edmund Optics) で増幅されました。リアルタイムのデータ収集と画像処理のために特別なソフトウェア（LabVIEW 2021、NI）が開発されました。レーザー出力と PMT ゲイン設定は、特殊なプリント基板を使用したマイクロコントローラー (#Arduino UNO、Arduino) によって決定されます。SMF とワイヤはコネクタで終端し、ベース ステーションの光ファイバー (F) ポートと有線 (W) ポートに接続します (図 6c)。イメージング システムはポータブル カートに搭載されています (図 6d)。 絶縁トランスを使用して漏れ電流を <500 μA に制限しました。 絶縁トランスを使用して漏れ電流を <500 μA に制限しました。 500 分以内に、500 分以内に到着します。 絶縁トランスを使用して漏れ電流を <500 µA に制限しました。隔離圧器を使用して、漏れ電流を <500 μA に制限します。 <500μA。 距離は 500 分未満です。 漏れ電流を 500µA 未満に制限するには、絶縁トランスを使用してください。
可視化システム。(a) PMT、レーザー、増幅器は基地局内にあります。(b) フィルター バンクでは、レーザー (青) が FC/APC コネクタを介して光ファイバー ケーブル上を駆動します。ビームはダイクロイック ミラー (DM) によって偏向され、2 番目の FC/APC コネクタを介してシングル モード ファイバー (SMF) に入ります。蛍光 (緑色) は、DM およびロングパス フィルター (LPF) を通って、マルチモード ファイバー (MMF) を介して PMT に伝わります。(c) 内視鏡の近位端は、ベース ステーションの光ファイバー (F) ポートと有線 (W) ポートに接続されます。(d) 内視鏡、モニター、ベースステーション、コンピュータ、およびポータブルカート上の絶縁変圧器。(a、c) Solidworks 2016 は、イメージング システムと内視鏡コンポーネントの 3D モデリングに使用されました。
集束光学系の横方向および軸方向の解像度は、直径 0.1 μm の蛍光微小球 (#F8803、Thermo Fisher Scientific) の点広がり関数から測定されました。リニアステージ (# M-562-XYZ、DM-13、Newport) を使用して、マイクロスフェアを 1 μm ステップで水平および垂直に移動して画像を収集します。ImageJ2 を使用して微小球の断面画像を取得した画像スタック。
リアルタイムのデータ収集と画像処理のために特別なソフトウェア（LabVIEW 2021、NI）が開発されました。図上。図７は、システムを動作させるために使用されるルーチンの概要を示す。ユーザーインターフェイスは、データ収集 (DAQ)、メインパネル、およびコントローラーパネルで構成されます。データ収集パネルはメイン パネルと対話して、生データを収集して保存し、カスタム データ収集設定の入力を提供し、スキャナ ドライバー設定を管理します。メイン パネルを使用すると、ユーザーは、スキャナ制御信号、ビデオ フレーム レート、取得パラメータなど、内視鏡を使用するための必要な設定を選択できます。このパネルでは、ユーザーが画像の明るさとコントラストを表示および制御することもできます。生データを入力として使用して、アルゴリズムは PMT の最適なゲイン設定を計算し、比例積分 (PI)16 フィードバック制御システムを使用してこのパラメーターを自動的に調整します。コントローラー ボードは、メイン ボードおよびデータ収集ボードと対話して、レーザー パワーと PMT ゲインを制御します。
システム ソフトウェア アーキテクチャ。ユーザー インターフェイスは、(1) データ収集 (DAQ)、(2) メイン パネル、および (3) コントローラ パネルのモジュールで構成されます。これらのプログラムは同時に実行され、メッセージ キューを通じて相互に通信します。鍵となるのは、MEMS：Microelectromechanical System、TDMS：Technical Data Control Flow、PI：Proportional Integral、PMT：Photomultiplierです。画像ファイルとビデオファイルは、それぞれ BMP 形式と AVI 形式で保存されます。
位相補正アルゴリズムを使用して、さまざまな位相値での画像ピクセル強度の分散を計算し、画像を鮮明にするために使用される最大値を決定します。リアルタイム補正の場合、位相スキャン範囲は ±2.86° で、ステップは 0.286° と比較的大きく、計算時間を短縮します。さらに、サンプルの少ない画像部分を使用すると、画像フレームの計算時間が 10 Hz で 7.5 秒 (1 M サンプル) から 1.88 秒 (250 K サンプル) にさらに短縮されます。これらの入力パラメータは、生体内イメージング中に最小限の待ち時間で適切な画質を提供するために選択されました。ライブ画像とビデオは、それぞれ BMP 形式と AVI 形式で記録されます。生データはテクニカル データ管理フロー フォーマット (TMDS) で保存されます。
LabVIEW 2021を使用した品質向上のための生体内画像の後処理。生体内イメージング中に位相補正アルゴリズムを使用する場合、必要な計算時間が長いため、精度が制限されます。限られた画像領域とサンプル数のみが使用されます。さらに、このアルゴリズムは、動きアーチファクトや低コントラストのある画像ではうまく機能せず、位相計算エラーが発生します30。高コントラストで動きアーチファクトのない個々のフレームが手動で選択され、0.01°ステップで±0.75°の位相スキャン範囲で位相微調整が行われました。画像領域全体が使用されました (たとえば、10 Hz で記録された画像の 1 M サンプル)。表 S2 は、リアルタイムおよび後処理に使用される画像パラメータの詳細を示しています。位相補正後、メディアン フィルターを使用して画像ノイズをさらに低減します。明るさとコントラストは、ヒストグラムストレッチとガンマ補正によってさらに改善されます31。
この臨床試験はミシガン州医療機関審査委員会によって承認され、医療処置局で実施されました。この研究はオンラインで ClinicalTrials.gov に登録されています (NCT03220711、登録日: 2017 年 7 月 18 日)。対象基準には、以前に予定的に結腸内視鏡検査を計画していた患者、結腸直腸がんのリスクが高い患者、炎症性腸疾患の病歴のある患者（18～100歳）が含まれた。参加に同意した各被験者からインフォームドコンセントを得た。除外基準は、妊娠している患者、フルオレセインに対する既知の過敏症を有する患者、または積極的な化学療法または放射線療法を受けている患者であった。この研究には定期的な結腸内視鏡検査を受ける予定の連続患者が含まれており、ミシガン医療センターの集団を代表したものでした。この研究はヘルシンキ宣言に従って実施されました。
手術前に、シリコン型に取り付けた 10 µm 蛍光ビーズ (#F8836、Thermo Fisher Scientific) を使用して内視鏡を校正します。半透明のシリコーンシーラント (#RTV108、Momentive) を 3D プリントした 8 cm3 プラスチックモールドに注ぎました。水蛍光ビーズをシリコーン上に滴下し、水媒体が乾燥するまで放置します。
結腸全体を、白色光照明を備えた標準的な医療用結腸鏡（オリンパス、CF-HQ190L）を使用して検査した。内視鏡医が病気の疑いのある領域を特定した後、その領域を5〜10mlの5％酢酸で洗浄し、次に滅菌水で粘液や破片を除去します。５ｍｇ／ｍｌのフルオレセイン（Ａｌｃｏｎ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｉｔｅ）の５ｍｌ用量を、作業チャネルを通過させた標準的なカニューレ（Ｍ００５３０８６０、Ｂｏｓｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して粘膜上に静脈内注射または局所的に噴霧した。
洗浄器を使用して、粘膜表面から余分な染料や破片を洗い流します。噴霧カテーテルを取り外し、内視鏡を作業チャンネルに通して生前の画像を取得します。広視野内視鏡誘導を使用して、遠位先端をターゲット領域に配置します。 共焦点画像の収集に要した合計時間は 10 分未満でした。 共焦点画像の収集に要した合計時間は 10 分未満でした。 Общее время, затраченное на сбор конфокальных изображений, составило <10 分。 共焦点画像の収集にかかった合計時間は 10 分未満でした。共焦点画像の合計取得時間は 10 分未満でした。内視鏡白色光ビデオは、Olympus EVIS EXERA III (CLV-190) イメージング システムを使用して処理され、Elgato HD ビデオ レコーダーを使用して記録されました。LabVIEW 2021を使用して内視鏡ビデオを録画および保存します。イメージングが完了したら、内視鏡を取り外し、生検鉗子またはスネアを使用して可視化する組織を切除します。 組織は日常的な組織学 (H&E) のために処理され、専門の消化器病理学者 (HDA) によって評価されました。 組織は日常的な組織学 (H&E) のために処理され、専門の消化器病理学者 (HDA) によって評価されました。 Ткани были обработаны для обычной гистологии (H&E) および оценены экспертом-патологом желудочно-киbolечного тракта (HDA)。 組織は日常的な組織学 (H&E) のために処理され、専門の胃腸病理学者 (HDA) によって評価されました。組織は通常の組織学的 (H&E) 処理を受け、GI 病理学者 (HDA) によって承認されました。組織は通常の組織学的 (H&E) 処理を受け、GI 病理学者 (HDA) によって承認されました。 Ткани были обработаны для обычной гистологии (H&E) および оценены экспертом-патологом желудочно-киbolечного тракта (HDA)。 組織は日常的な組織学 (H&E) のために処理され、専門の胃腸病理学者 (HDA) によって評価されました。フルオレセインのスペクトル特性は、図S2に示すように分光計（USB2000+、Ocean Optics）を使用して確認されました。
内視鏡は人間が使用するたびに滅菌されます（図8）。洗浄手順は、ミシガン医療センターの感染制御疫学部門および中央滅菌処理ユニットの指示と承認の下で実行されました。 研究に先立って、感染予防および滅菌検証サービスを提供する営利団体である Advanced Sterilization Products (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン) によって器具の滅菌がテストおよび検証されました。 研究に先立って、感染予防および滅菌検証サービスを提供する営利団体である Advanced Sterilization Products (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン) によって器具の滅菌がテストおよび検証されました。 高度な滅菌製品 (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン)、 одобрены для стерилизации компанией Ланизацией、предоставляющей услуги по профилактике инфекций и проверке стерилизации. 研究に先立って、感染予防および滅菌検証サービスを提供する営利組織である Advanced Sterilization Products (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン) によって器具の滅菌がテストされ、承認されました。 高度な滅菌製品 (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン) を参照してください。 тавляет услуги по профилактике инфекций и проверке стерилизации. 器具は研究前に、感染予防および滅菌検証サービスを提供する営利団体である Advanced Sterilization Products (ASP、ジョンソン・エンド・ジョンソン) によって滅菌および検査されました。
工具のリサイクル。(a) 内視鏡は、STERRAD 処理プロセスを使用して滅菌するたびにトレイに置かれます。(b) SMF とワイヤはそれぞれ光ファイバーと電気コネクターで終端処理され、再処理の前に閉じられます。
以下の手順に従って内視鏡を清掃してください。(1) 酵素クリーナーに浸した糸くずの出ない布で内視鏡を近位から遠位に向かって拭きます。(2) 水の入った酵素洗剤溶液に機器を 3 分間浸します。糸くずの出ない生地。電気コネクタと光ファイバーコネクタはカバーされ、ソリューションから取り外されます。(3) 内視鏡を包み、器具トレイに置き、STERRAD 100NX、過酸化水素ガスプラズマを使用して滅菌します。比較的低温、低湿な環境。
現在の研究で使用および/または分析されたデータセットは、合理的な要求に応じて各著者から入手できます。
Pilonis, ND、Januszewicz, W. & di Pietro, M. 消化管内視鏡における共焦点レーザー内視鏡検査：技術的側面と臨床応用。 Pilonis, ND、Januszewicz, W. & di Pietro, M. 消化管内視鏡における共焦点レーザー内視鏡検査：技術的側面と臨床応用。Pilonis, ND、Januszewicz、V. i di Pietro、M. 消化管内視鏡における共焦点レーザー内視鏡検査：技術的側面と臨床応用。 Pilonis, ND、Januszewicz, W. & di Pietro, M. 胃腸内検査における共焦点レーザー内検査：技術的側面と臨床応用。 Pilonis, ND、Januszewicz, W. & di Pietro, M. 共著肠分别在在共公司设计在机机：技術的側面と臨床応用。Pilonis, ND、Januszewicz、V. i di Pietro、M. 消化管内視鏡における共焦点レーザー内視鏡：技術的側面と臨床応用。翻訳胃腸用ヘパリン。7、7 (2022)。
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